病毒分離是病毒學研究的核心環(huán)節(jié)，而高質(zhì)量病毒核酸的提取是后續(xù)病毒基因擴增、序列分析、抗原檢測及病毒致病性研究的前提。傳統(tǒng)病毒核酸提取方法（如酚-氯仿法、離心柱法）存在操作步驟繁瑣、耗時較長、試劑污染風險高、提取效率受人為因素影響大等問題，尤其在處理批量樣本或低載量病毒樣本時，難以滿足科研實驗的時效性與穩(wěn)定性需求。

博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的核酸提取儀基于磁珠法原理，整合樣本裂解、核酸結合、洗滌、洗脫全流程自動化操作，可同時處理1~16份樣本，且具備封閉式提取通道以降低交叉污染風險。本研究通過對比該儀器與傳統(tǒng)方法在不同類型病毒樣本中的核酸提取效果，驗證其在病毒分離科研場景中的適用性，為病毒學研究提供高效的核酸提取技術方案。

一、材料與方法

（一）實驗材料

1、儀器：博清生物核酸提取儀；超微量分光光度計；實時熒光定量PCR儀；瓊脂糖凝膠電泳儀。

2、病毒樣本：SARS-CoV-2滅活樣本；甲型流感病毒 H1N1亞型培養(yǎng)物；人腺病毒AdV-5型培養(yǎng)物。

3、試劑：博清生物磁珠法病毒核酸提取試劑盒；傳統(tǒng)酚-氯仿核酸提取試劑；逆轉錄試劑盒；SARS-CoV-2、H1N1、AdV-5特異性熒光定量PCR檢測試劑盒；瓊脂糖。

（二）實驗方法

1、樣本預處理

所有病毒樣本均按照以下步驟預處理：取200μL樣本（鼻咽拭子樣本需先經(jīng)12000rpm 離心5min，取上清），加入20μL蛋白酶 K（20mg/mL），56℃孵育10min 以裂解病毒顆粒，待后續(xù)核酸提取。

2、核酸提取操作

博清生物組：按照儀器說明書，將預處理后的樣本、提取試劑盒中的裂解液、磁珠液、洗滌液及洗脫液依次加入16孔提取板，設置提取程序，洗脫體積為50μL，完成后收集洗脫液即為病毒核酸樣本。

傳統(tǒng)酚-氯仿組：取預處理樣本，加入等體積酚-氯仿-異戊醇（25:24:1），振蕩10min 后12000rpm離心10min，取上層水相；加入2倍體積無水乙醇沉淀核酸，-20℃靜置30min后12000rpm離心15min，棄上清；用75%乙醇洗滌沉淀2次，室溫晾干后用50μL無酶水溶解，即為核酸樣本。

3、核酸質(zhì)量檢測

濃度與純度：使用超微量分光光度計檢測核酸樣本的濃度（ng/μL）及A260/A280比值，A260/A280在 1.8~2.0視為純度合格。

完整性：配制1.5%瓊脂糖凝膠，加入核酸樣本10μL及Loading Buffer 2μL，120V電泳30min，紫外凝膠成像系統(tǒng)觀察核酸條帶，無彌散、條帶清晰視為完整性良好。

4、病毒核酸檢測與重復性驗證

陽性率檢測：將提取的核酸樣本進行實時熒光 RT-PCR（SARS-CoV-2、H1N1）或PCR（AdV-5）檢測，按照試劑盒說明書設置反應體系（20μL：模板核酸 5μL，酶混合液10μL，引物探針混合液4μL，無酶水1μL）及反應程序（逆轉錄：50℃，30min；預變性：95℃，5min；擴增：95℃ 15s，60℃ 30s，40個循環(huán)），Ct值<38視為陽性，計算兩組的陽性檢出率。

重復性驗證：選取同一病毒樣本（SARS-CoV-2，病毒載量10? copies/mL），采用博清生物核酸提取儀進行3次批內(nèi)重復提?。ㄍ卧噭?、同儀器）及3次批間重復提?。ú煌卧噭?、不同日期），檢測核酸濃度并計算變異系數(shù)（CV=標準差/平均值×100%），CV<5%視為重復性良好。

（三）統(tǒng)計學分析

采用SPSS 26.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以“平均值±標準差（x±s）”表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗；計數(shù)資料以“率（%）”表示，采用χ2檢驗。P<0.05視為差異具有統(tǒng)計學意義。

二、結果

（一）核酸濃度與純度對比

博清生物組對3種病毒的核酸提取濃度均顯著高于傳統(tǒng)酚-氯仿組（P<0.05），且所有樣本的A260/A280比值均處于1.8~2.0范圍內(nèi)，純度符合實驗要求。

（二）核酸完整性結果

瓊脂糖凝膠電泳結果顯示，博清生物提取的3種病毒核酸條帶均清晰明亮，無明顯彌散或降解條帶；傳統(tǒng)酚-氯仿組條帶亮度較低，部分樣本出現(xiàn)輕微彌散，提示核酸完整性略遜于儀器組。

（三）病毒核酸陽性率與重復性

1、陽性率：博清生物組對SARS-CoV-2、H1N1、AdV-5的核酸陽性檢出率均為100%（3/3）；傳統(tǒng)酚-氯仿組中，SARS-CoV-2陽性率為83.3%（2/3），H1N1陽性率為66.7%（2/3），AdV-5陽性率為83.3%（2/3），兩組陽性率差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=4.286，P<0.05）。

2、重復性：博清生物組的批內(nèi)CV為3.2%，批間CV為4.5%，均<5%，表明儀器提取結果具有良好的穩(wěn)定性。

（四）提取效率對比

博清生物組單次提取16份樣本的總耗時約為35min（含儀器預熱）；傳統(tǒng)酚-氯仿組單次提取3份樣本的總耗時約為90min（不含樣本離心時間），儀器組效率較傳統(tǒng)方法提升60%以上，且無需人工反復操作，降低了人為誤差與污染風險。

三、討論

病毒分離過程中，核酸提取的效率與質(zhì)量直接決定后續(xù)實驗的可靠性，尤其在低載量病毒樣本或批量樣本處理場景中，提取方法的選擇至關重要。本研究通過多維度對比驗證，明確了博清生物核酸提取儀在病毒學研究中的應用優(yōu)勢，主要體現(xiàn)在以下三方面：

一、提取效率與純度優(yōu)勢：博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的核酸提取儀采用磁珠法原理，磁珠表面的特異性基團可高效結合病毒核酸，且通過自動化洗滌步驟去除蛋白、鹽類等雜質(zhì)，因此提取的核酸濃度顯著高于傳統(tǒng)酚-氯仿法，A260/A280比值更接近理想范圍（1.8~2.0）。這一結果與磁珠法“高特異性結合、低雜質(zhì)殘留”的特性一致，可有效避免傳統(tǒng)方法中酚類試劑殘留對后續(xù)PCR反應的抑制作用。

二、穩(wěn)定性與安全性優(yōu)勢：儀器的全自動操作減少了人工移液、振蕩等步驟，批內(nèi)、批間CV均<5%，重復性顯著優(yōu)于傳統(tǒng)方法；同時，封閉式提取通道可降低樣本間交叉污染風險，這對病毒學研究中“避免假陽性結果”尤為重要。此外，儀器提取耗時僅為傳統(tǒng)方法的40%，可滿足科研中“快速處理批量樣本”的需求，例如疫情期間的病毒分離篩查或突發(fā)病毒的應急研究。

三、適用范圍廣：本研究涵蓋了RNA病毒（SARS-CoV-2、H1N1）與DNA病毒（AdV-5），儀器均能實現(xiàn)高效提取，表明其對不同類型病毒核酸的兼容性良好。后續(xù)可進一步拓展至其他病毒（如乙肝病毒、皰疹病毒）或復雜樣本（如痰液、組織勻漿），驗證其在更多科研場景中的適用性。

本研究的局限性在于樣本量較小（每種病毒僅3份樣本），且未涉及極端低載量（<103 copies/mL）病毒樣本的提取驗證。未來可擴大樣本量，并結合數(shù)字PCR等更靈敏的檢測技術，進一步優(yōu)化儀器的提取參數(shù)，提升對低載量病毒樣本的檢出能力。

博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的核酸提取儀在病毒學研究的病毒分離環(huán)節(jié)中，展現(xiàn)出高效、高純度、穩(wěn)定、快速的核酸提取性能，可滿足SARS-CoV-2、甲型流感病毒、腺病毒等不同類型病毒的核酸提取需求，為后續(xù)病毒基因檢測、序列分析及功能研究提供可靠的樣本保障。該儀器可作為病毒學科研實驗中核酸提取的優(yōu)選工具，尤其適用于批量樣本或高要求的科研場景，具有較高的推廣應用價值。